纽约讯——过去五年开创的结核病分子诊断方法正日益受到重视，减少结核病例的进展也在逐步改善，但专家表示，要消灭这种疾病仍然任重道远。

上周，世界卫生组织报告称，2024年结核分枝杆菌感染人数略有下降，这是自COVID-19大流行以来的首次下降，为世卫组织实现到2030年消除结核病的目标带来了希望的信号。

2024年，结核病在全球导致123万人死亡，这一数字堪比美国罗德岛州的人口。对一些人来说，结核病的病例数尤其令人愤慨，因为这种疾病是可预防、可治疗且可治愈的。正如国际防痨和肺部疾病联合会上周就世卫组织新报告发表的声明中所说："结核病仍然是世界上头号传染性杀手，这完全是不公正的，也是全球卫生的失败。"该国际援助组织补充道："再也没有借口了。"

世卫组织报告称，2015年至2024年间，死亡总人数下降了29%，但这仍远未达到所有世卫组织和联合国成员国商定的《终止结核病战略》里程碑目标——即到2025年降低75%，到2030年降低90%。

专家们一致认为，诊断技术将是终结结核病危害的关键，而快速分子检测是世卫组织推荐的一线方法。然而，尽管在2024年830万新诊断的结核病病例中，有54%使用了快速分子诊断检测，但国际防痨和肺部疾病联合会谴责这一水平"不可接受"，因为这意味着近一半的病例是通过敏感性和特异性较低的方法（如痰涂片镜检或微生物培养）诊断的。这些方法可能导致误诊，并有可能助长耐药性。

在众多结核病诊断新方法中，使用痰液样本的替代品、靶向下一代测序以及基于CRISPR的方法，可能会改善特殊人群的耐药性检测和诊断。

根据治疗行动小组七月份发布的结核病诊断工具指南，世卫组织最近为了预认证评估的目的，对结核病检测进行了重新分类，将其分为分子和非分子两大类，并按复杂程度和自动化程度进行划分。

例如，在低复杂度自动化核酸扩增检测中，Cepheid公司的GeneXpert系统仍然是全球应用最广泛的系统。世卫组织几年前将Molbio公司的TrueNAT系统列入其预认证检测名单。对于耐药结核病流行率低的地区，世卫组织还推荐使用荣研化学的环介导等温扩增检测用于结核病初步检测。同时，被视为中等复杂度的实验室分子检测和系统则包括来自雅培、碧迪、罗氏以及布鲁克子公司Hain Lifescience的产品。

去年更新的世卫组织指南也促进了新方法的快速引入。根据治疗行动小组的报告，新检测方法可以由世卫组织全球结核病规划快速评估，以确定它们属于现有的诊断类别，还是需要创建一个新类别。符合现有类别的新检测方法会被提交进行预认证评估，而不符合现有分类的则由全球结核病规划进行证据评估。如果该规划推荐该检测方法，则可以在建立新类别和完成标准预认证评估之前进行采购和引入，从而使得新检测技术能够更快速地部署。

分子诊断的兴起

大约15年前，Cepheid公司凭借GeneXpert推出了首个基于PCR的快速结核病检测，此后该方法的采用率急剧上升。"这是一个如何实现分子诊断的绝佳范例，"英国指定的国家计量院LGC集团的生物计量学主任Jim Huggett在接受采访时表示。

Huggett及其同事上个月发布了一项针对41个国家118个实验室的调查，记录显示分子检测的使用几乎已经普及。

更新的分子检测方法也在争夺一席之地，特别是那些可以使用舌拭子样本而非咳出的痰液的方法，因为对于儿童和HIV感染者来说，获取痰液标本很困难。

加州大学旧金山分校的研究员Adithya Cattamanchi上月底共同发表了一项基于两种分子拭子检测的比较研究。

"基于拭子的结核病分子检测是真正的游戏规则改变者，"Cattamanchi在一封电子邮件中表示，因为拭子处理起来比痰液更简单。他说，拭子可以在痰液中搅动（称为痰拭子），也可以在舌头上刮擦以获取舌拭子，后者有助于"确保几乎所有推定结核病患者都能接受检测，无论其能否产生痰液。"

Cattamanchi和一个国际合作团队使用痰拭子和舌拭子评估了Pluslife公司的MiniDock结核检测和Molbio公司的MTB Ultima检测。他表示，该分析旨在作为一项初步研究，为更大规模的多国验证研究提供支持。

Cattamanchi说，Pluslife MiniDock结核检测是一种近床旁检测，而Molbio MTB Ultima尚未分类，但可能是一种低复杂度或近床旁检测。MiniDock是一个高度便携、电池供电的系统，他补充说，"预计其成本将远低于当前基于痰液的低复杂度分子检测。"

它也有可能填补Cepheid Omni（几年前已停产）原本打算填补的空白。Cattamanchi说："因此，它代表了一项重大进步，应能改善结核病检测的可及性。"不过他也承认，该领域仍然需要一种符合世卫组织目标产品概况定义的真正床旁检测。

在另一项近期作为预印本发表的关于这两种新检测方法和途径的评估中，一个研究联盟得出结论，尽管拭子检测的灵敏度低于基于痰液的GeneXpert PCR，但可能足以满足初步检测的阈值要求。

与此同时，在本周举行的世界肺部健康联盟大会上，研究人员计划展示一种来自华大基因的名为Genewise-MTBC的舌拭子检测。在中国进行的一项评估中，与培养法相比，该检测显示出约81%的灵敏度和100%的特异性。此外，一项在Xpert Ultra检测上运行舌拭子的评估也显示了类似的结果。

靶向下一代测序是另一种有吸引力的方法，尤其适用于耐药性检测。该方法于2024年被世卫组织推荐用于后续的耐药性检测，目前推荐的NGS平台包括GenoScreen的Deeplex Myc-TB、牛津纳米孔公司的AmPore-TB以及一种名为TBseq（来自申霆）的检测。

由生物梅里埃和牛津纳米孔技术公司合作开发的AmPore-TB于本月早些时候正式推出供研究使用。两家公司在声明中表示，该检测使用牛津纳米孔的台式专用GridIon设备，可分析24个结核耐药基因，并在同一天提供全面结果。

根据世界肺部健康联盟大会的一份摘要，在吉尔吉斯斯坦对tNGS结核检测早期试用版本进行的一项评估发现，该方法在检测新药耐药性方面具有附加价值，在试剂和人员持续可用的情况下，检测周转时间短至六天。同样，在坦桑尼亚正在进行的一项ONT检测早期试用研究也表明，与表型药物敏感性测试相比，tNGS可以支持及时的临床决策。

同样在世界肺部健康联盟大会上，预计将展示对五种不同CRISPR方法的评估。其中一项报告来自杜兰大学的一个研究团队，该团队最近开发了一种用于筛查的"一锅法"结核检测，他们将描述一种基于多重微滴的CRISPR-Cas12a检测方法，可在90分钟内检测耐药突变，用于床旁诊断和耐药性监测。

尽管取得了所有这些进展，但Huggett及其同事最近的评估也发现，全球约有10%的分子检测在没有适当质量评估的情况下进行。

Huggett说，外部质量评估尤其缺乏，这是一个用定量分子标准品评估检测并与其他实验室结果进行比较的过程。这可能导致患者接受基于未经独立验证的检测结果的治疗，Huggett认为这很危险。

他说，总体而言，结核病分子检测的质量控制需要改进。"每个人都说我们需要诊断技术；如果有人提出我们还需要标准，大家都点头同意，但没有人去落实。"然而，鉴于今年早些时候美国大幅削减资金，现在无论是开发新检测方法还是改进质量控制，前进的道路都可能需要增加全球投资。