昨天，器审中心放出了厦门致善生物科技股份有限公司的《结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变检测试剂盒（荧光PCR熔解曲线法）审评报告》，这款产品是在9月17日发公告获批的，在9月9日的时候就发布了它的审评报告，药监的动作是蛮快的。
这款产品是专门针对吡嗪酰胺耐药相关基因突变进行体外定性检测，也属于“国家科技重大专项”项目，集结了很多buff在身上啊，所以，今天我就给大家来聊聊它的审评报告。
从pncA基因切入
结核实际是个很热门的赛道，大家一直都很关注这个方向。
主要是由于结核病现在依然是全球最致命的传染病之一，而我国作为全球结核病高负担国家，每年新发病例数居高不下。
而吡嗪酰胺一直是一线抗结核治疗方案中的“核心成员”。
但与此同时，结核分枝杆菌对吡嗪酰胺产生耐药的情况也愈发常见，一旦耐药，原本有效的短程化疗方案可能失效，治疗周期被迫延长，患者痛苦增加，治愈难度也会大大增加。
此次致善生物获批的试剂盒，正是瞄准了吡嗪酰胺耐药的关键部分——结核分枝杆菌复合群的pncA基因。
科学研究早已证实，pncA基因编码的吡嗪酰胺酶是细菌代谢吡嗪酰胺的关键蛋白，当这个基因发生突变时，吡嗪酰胺酶功能异常，细菌便对药物产生了耐药性。
而该试剂盒的检测范围，覆盖了pncA基因全基因中187个氨基酸密码子对应的561bp区域（即国际公认的吡嗪酰胺耐药决定区），以及其上游启动子区域的-1至-16共16bp序列。
这两个区域，正是目前已知的与吡嗪酰胺耐药关联最为密切的突变热点。
但也要特别说明一下，这款试剂盒目前只能检测出是否存在耐药相关突变，但尚无法明确具体的突变类型。
不过这个也并不影响它的临床价值——通过识别突变的存在，医生可以快速判断患者体内的结核菌是否可能对吡嗪酰胺耐药，从而为调整治疗方案提供重要参考。
实际上，对于那些资源有限的基层地区，或者疫情紧急情况下，这种快速筛查能力对于临床应用来件是更加重要的一件事。
荧光PCR熔解曲线法
这款产品采用的是荧光PCR熔解曲线法，这个技术平台也是厦门致善的核心技术平台了，基本上他们家获批的核酸盒子，都是采用这个方法学的。
简单来来讲啊，这项技术的核心在于“温度变化下的荧光信号差异”。
在检测过程中，试剂盒的PCR体系里加入了特殊的荧光探针——这种探针的两端分别标记了荧光基团和淬灭基团，正常情况下荧光被淬灭，检测不到信号。
当PCR扩增开始后，探针会与目标DNA序列结合，此时荧光信号恢复；而当PCR完成、进入熔解阶段时，随着温度逐渐升高，DNA双链逐渐解链（熔解），探针与DNA的结合会被破坏，荧光信号随之下降。
所以这个技术的关键点就在于，如果目标DNA序列是完全匹配的（即没有突变），探针与它的结合非常紧密，熔解时需要更高的温度（表现为更高的Tm值，即熔点）。
但是，如果序列中出现了突变（比如某个碱基被替换、插入或缺失），探针与DNA的结合就会变弱，熔解温度会降低。
通过实时监测荧光值随温度变化的曲线（熔解曲线），并计算Tm值的变化，就能间接推断出是否存在突变。
当然，为了进一步提升检测的准确性和可靠性，在这款产品当中，做了两个质控体系。
第一个是针对结核分枝杆菌的另一个保守基因gyrB进行检测，用于辅助判断样本中是否存在结核菌以及辅助耐药判读。
另外一个则是加入了外源内标（拟南芥的SUC2管家基因），全程监控扩增反应是否正常进行，避免假阴性或假阳性结果的出现。
从技术审评报告当中的内容来看，试剂盒的灵敏度是很高的——最低检测限达到102CFU/mL，也就是每毫升样本中只需含有100个结核分枝杆菌即可检出。
并且能识别出占比50%及以上的异质性突变样本，即便样本中只有一半的细菌携带耐药突变，也有很大概率被检测出来。
18个月！
就像我在开篇说的一样，这个试剂还要一个特别的地方，它是个优先审批产品。
在2024年3月19日，器审中心就发布过的公开信息，对其进入了优先审批申请审核结果进行公示。
在公示当中，就明确提到“同意理由为：该产品属于‘列入国家科技重大专项’的医疗器械”。
和创新审批不太一样，优先审批更像高速上面的绿色通道。
具体来说啊，就是技术审评单独排队，所有优先审批的医疗器械注册申请会按照接收时间单独排序，确保技术审评优先进行。
体系检查也是优先做，省级药监部门也会优先安排注册质量管理体系核查。
当然，还有一个好处就是在技术审评过程中，器审中心会主动与申请人保持密切沟通，必要时甚至安排专项交流，在资料补正上面会有优势。
所以这个产品从公示到最终获批，总共就18个月。
这个速度相当快了啊，要知道这个产品本身就是一个首创产品，是没有同类已上市产品的，一般这类产品能在2-3年上市，已经是很顺利了，所以优先审批至少减少了四分之一到一半的上市时间。
临床验证很扎实
结核检测类产品和其他产品不太一样，它在各地是有定点收治机构的，厦门致善最后也选择了在广州市胸科医院、福建省福州结核病防治院和山东省公共卫生临床中心开展临床试验。
临床实验设计上面来讲，遵循了我们一直强调的检测系统-分类器二分法原则，整个实验也分为两部分。
检测系统部分的参考对象选择的是一代测序，这也是没有已上市同类分子产品的一个标准选择。
而分类器部分的参考对象选择的事金标准，药敏实验，通过培养结核菌后观察其对吡嗪酰胺的药物敏感性来判断耐药性。
试验覆盖了两种最常见的临床样本类型，直接取自患者的痰液，以及实验室培养的结核菌。
临床数据相当不错啊。
在痰液样本中，与药敏试验对比的临床灵敏度为94.41%（意味着能准确识别出94%以上的耐药患者），特异度为98.34%（意味着能准确排除98%以上的非耐药患者）；与一代测序对比的灵敏度更是高达98.34%，特异度达到100%。
在培养物样本中，与药敏试验对比的灵敏度为93.28%，特异度为98.56%；与一代测序对比的灵敏度为98.39%，特异度同样为100%。
稳定性有点遗憾
在稳定性方面，试剂盒还是有点遗憾的，它要在-18℃下避光保存，这意味着产品需要冻存，整个运输和保存成本都会更高。
现在很多分子产品，都在往冻干+常温保存迈进，所以这个保存条件的竞争力会差一些。
而在稳定性验证实验的时候，选择了-20±5℃和-70℃避光条件这两个条件，这有点奇怪。
当然审评报告里面没有说明原因，但我推测，厦门致善可能采用的是等时的稳定性方案做的，而不是经典方案做，这样才会涉及到-70℃这个低温条件。
在关键指标的选择上，倒是传统做法，检测外观、参考品符合率、最低检测限等关键指标，应该是没有采取被测量漂移这个做法，否则必然会说一句。
另外，对于产品的冻融稳定性、运输稳定性以及样本稳定性也都经过了系统评估。
写在最后
厦门致善是结核检测领域的老玩家了，基本上结核病检测的相关试剂盒都有。
其实在2016年的时候，国家局就在官网发文，批准了厦门致善的三款结核耐药试剂。
这次结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药突变检测试剂盒（荧光PCR熔解曲线法）的快速获批，也给我们提供了一个宝贵的案例经验。
要想赚钱，要跟着国家的政策走——搞创新医疗器械，要聚焦临床未满足要求——医疗产品要能够为整个社会减负，在这个基础上面，深耕核心技术，这样才能够在当前IVD大变局当中，占据先机。
最后，祝产品大卖！
文章来源于诊断科学，作者认真的刘博
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